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第二节 质量控制
在流式细胞仪检测样本前，需要采用标准微球对仪器散射光和荧光信号的光电倍增管( photomechanical transfer，PMT)电压、增益等参数进行检验和校正，多色分析还需进行颜色补偿，进而通过同型对照或阴性对照等设定检测阈值，并定期进行室内质控和室间质评监控。
一、验证和调整光路
每次开机时，首先用荧光标准微球验证仪器的光路，用电压校准微球调整FSC、SSC及荧光检测通道的电压和增益，使每一通道检测粒子数的峰变异达到要求(参考试剂说明书)。固定电压后，连续20天测定荧光微球在每个检测通道的平均通道数和CV，然后计算出这些参数的均数及标准差，以均值±2SD作为可接受范围。随后每次验证和调整光路时，均需要记录平均通道值及CV，并与其对应的可接受范围进行比较，判断是否失控。如有失控，及时查找原因，如仪器管路是否彻底清洗，校准微球是否过期，并采取相应的处理措施，必要时请专业工程师维修。
二、监测荧光检测稳定性
定期监测荧光检测稳定性对于白血病免疫表型分析和MRD监测时准确定量抗原表达强度非常重要。荧光检测稳定性是通过对仪器的PMT电压进行监测而实现，采用已知相对荧光强度的多色荧光微球混合物上机测定，设置与检测临床标本相同的PMT电压，记录每一种荧光微球的平均荧光强度( mean fluorescenceIntensity index，MFI)，连续测定20天，计算出每一种微球的可接受MFI范围，确保每一种荧光微球MFI的相关系数≥0.98。随后，每月一次或按照仪器供应商的推荐周期进行荧光检测稳定性的监测。在仪器PMT电压不变的情况下，各种荧光微球的荧光MFI差异应保持不变。如有失控，及时查找原因，如仪器管路是否彻底清洗，校准微球是否过期，并采取相应的处理措施，必要时请专业工程师维修。
三、荧光补偿
荧光补偿对于正确分析检测结果至关重要，当采用多种抗体组合方案时需要调整荧光补偿。根据多色分析采用的荧光染料种类和数量，通过新鲜细胞样本合理进行补偿设置，FMO方案可以更准确地设门，清楚地区分出阳性和阴性细胞群。亦可选用商品化的标准补偿试剂。建议每次进行多色分析前均需进行荧光补偿验证和调整。
四、抗体的选择
抗体的浓度、克隆号和批号对于染色结果极其重要。新的抗体使用前，应根据自己实验室的实际情况确定使用浓度(即抗体滴度) ;更换抗体批号时需要进行不同批号的比对试验，以确保染色结果的一致性。多种抗体组合使用时，应比较每种抗体单独应用和组合应用的结果是否有差别，无差别时，方可用于多色分析。
1.抗体的选择和合理组合的原则
( 1)尽可能选择体外诊断( in vitro diagnosis，IVD)试剂或分析特异性( analyte specific reagent，ASR)试剂，其特异性、灵敏度、精密度和适用范围符合临床常规检测要求。
( 2)相同CD编号的抗体可能识别不同的抗原决定簇，选择抗体前，首先了解拟使用抗体的克隆来源和细胞反应谱。
( 3)表达量少的抗原或弱表达抗原应尽可能选择长波长荧光素标记的抗体。
( 4)抗体的多种组合可能通过空间构型阻碍与抗原的结合，组合抗体前，应了解每个抗体单染色细胞时的表达率和(或)表达强度。
2.比对
建议相同项目尽量在同一台仪器上进行检测，如果在多台仪器上进行相同项目测定，至少半年进行一次比对。选择10份有代表性的临床标本，按照实验室标准化操作规程进行测定。实验室需制定比对结果可接受区间，及校正程序和方法。
3.对照设置
对照可以分为两类，一类对照用于设定流式细胞仪的检测阈值，包括同型对照、空白对照和正常对照等;另一类用于监测抗体和试剂的质量及整个实验过程，类似于质控品，包括阳性对照、阴性对照和正常对照等。
( 1)同型对照:
理论上是理想的对照，主要用于监测细胞自发荧光和抗体的非特异结合，但实际使用时同型对照与测试抗体对细胞的标记偶尔会出现偏差，尤其对表达量很低的抗原进行细胞计数时。
( 2)空白对照:
主要用于监测细胞的自发荧光，在无法设置同型对照时，可采用空白对照设置检测阈值，如采用荧光素TO对网织红细胞染色时。同型对照或空白对照通常在每个实验组进行流式细胞仪测定时都需要设定，这两种对照都不是绝对的“对照”，只能作为一种参考，在某些情况下，如阴性峰和阳性峰分界很清楚时，对照的作用不是很大。
( 3)阳性对照和阴性对照:
对于某些实验无法得到商品化质控品时，必须设置实验室内阳性对照和阴性对照用于监测整个实验过程。如针对PNH诊断进行CD55和CD59计数和针对血小板无力症和巨大血小板综合征进行血小板膜糖蛋白检测时，必须以来源于健康人的标本作为阳性对照。
( 4)正常对照:
除具有质控品作用外，正常对照在某些实验中也起到设定阈值的作用，如在PI染色进行细胞周期和倍体分析时，正常淋巴细胞和鸡红细胞的二倍体峰所在位置决定了待测细胞倍体是否正常或异常。
五、室内质量控制
实验室应开展室内质量控制，考虑到流式细胞分析质控品成本较高，一些检测项目难以做到检测当天至少1次，可根据实际情况适当延长检测质控品的周期。开展室内质量控制前，应使用健康志愿者的新鲜外周血上机测定，以确认检测结果的重复性。
六、室间质量评价
室间质量评价主要是控制实验室工作的不准确度，实验室应参加国内(如卫生部临床检验中心)或国外质评机构组织(如美国病理学家学会)的室间质量评价和能力验证( proficiency test，PT)，用于能力验证的样本必须与患者标本同等对待，要求检验人员和检验流程完全一致。如发生任何失控问题，应积极采取纠正措施预防其再次发生，并记录所有质量保证活动。实验室需要对能力验证时样本的接收、检测前处理、检测、检测后分析与解释及检测报告等相关资料进行保存。
七、人员培训要求
流式细胞分析室应具有监督人员和操作人员岗位，并制定用于培训的标准化操作规程。实验室监督人员对每一位操作人员的培训效果、流式细胞术检验能力进行考核并决定是否授权上岗。监督人员和操作人员应完成流式细胞仪厂家的基本培训以及专业操作培训班的定期培训，并跟进政府或地区对培训和教育的政策措施。