脑脊液( cerebrospinal fluid，CSF)中的蛋白质含量很低，仅相当于血浆蛋白的5%，分别来源于:①主要是由血浆蛋白质经血脑屏障超滤进入，以白蛋白为主;②由中枢神经系统合成释放的少量蛋白质，如免疫球蛋白等。检测病理情况下因血脑屏障的通透性改变、中枢神经系统大量合成释放，导致的CSF中蛋白质的量和种类改变，有其临床意义。由于CSF总蛋白浓度低，血清总蛋白测定常用的双缩脲法灵敏度不能满足其要求，不宜采用。目前国内脑脊液总蛋白( cerebrospinal fluid total protein，CSF-TP)测定常用邻苯三酚红钼络合显色法、免疫比浊法、沉淀比浊法和染料结合法，分别介绍如下。

邻苯三酚红又称焦酚红，和钼酸络合，可生成475nm有吸收峰的红色络合物，在酸性条件下，该络合物可与蛋白质形成604nm有吸收峰的紫色复合物，在此波长检测该复合物的吸光度变化，可定量CSF总蛋白浓度。

称取甘氨酸7.5g，氯化钠5.844g，加蒸馏水定容至1000ml。取此液81份与0.1mol/L HCl溶液19份混匀即成。

称取邻苯三酚红27mg、钼酸铵30mg，用上述缓冲液溶解、定容至1000ml，置棕色瓶内，25℃以下避光保存。

500mg/L。

如果用试剂盒，应选用有正式批文，质量可靠的试剂盒。

按表2-1-7操作。

各管混匀，室温下放置20分钟，1小时内在604nm波长以1.0cm光径比色杯，空白管调零，读取测定管和标准管吸光度。

同“1.手工检测”。

有供自动生化分析仪使用的本法配套试剂盒，多采用固定时间两点终点法，600nm波长测定。应严格按照试剂盒及适用的自动生化分析仪说明书，结合本科室的SOP文件，设置各项参数进行检测。

仪器可自动计算出样本蛋白质浓度。

本法在CSF总蛋白浓度＜2g/L存在良好线性，超过此浓度应稀释脑脊液重新测定，并按稀释倍数校正。标本较多单位，可用系列浓度蛋白标准建立标准曲线及回归方程，并确定该法在本科室检测系统的线性范围，既可直接根据测定管吸光度计算出样本浓度，也可发现超出线性范围的浓度过高标本。

表面活性剂对本法有干扰，需避免其污染。

磺基水杨酸-硫酸钠可使蛋白质发生变性沉淀，导致浊度升高，浊度改变与蛋白质浓度成正比，得以定量CSF总蛋白浓度。

称取二水磺基水杨酸3.0g，无水硫酸钠7.0g，以蒸馏水溶解、定容至100ml，必要时过滤后使用。

称取叠氮钠0.1g、氯化钠0.9g，以蒸馏水溶解、定容至100ml。

将血清总蛋白测定用标准液用叠氮钠生理盐水稀释为500mg/L，4℃冷藏保存(勿冷冻)，临用时取出。

如果用试剂盒，应选用有正式批文，质量可靠的试剂盒。

按表2-1-8操作。

各管混匀，室温下放置10分钟，在530nm波长以1.0cm光径比色杯，空白管调零，读取测定管和标准管吸光度。

1.方法学特点　本法在加入沉淀剂后10分钟内浊度进行性增加，到10分钟时达顶点，故应在反应10分钟后及时测定。若有絮状沉淀出现，应反复颠倒消除絮状，否则会严重影响测定准确性。

2.标本要求　本法需要的CSF量较多，并且要求用离心沉淀CSF中的细胞及其他微小颗粒后的上清液进行测定。

3.试剂要求　磺基水杨酸-硫酸钠试剂放置过久，会产生细微沉淀，应重新配制。

4.高值标本处理　CSF总蛋白浓度过高，超过本法线性范围时，必须稀释后重新测定。因此，标本较多的单位，可用系列浓度蛋白标准建立标准曲线及回归方程，并确定该法在本科室检测系统的线性范围，既可直接根据测定管吸光度计算出样本浓度，也可发现超出线性范围的浓度过高标本，稀释处理，保证准确性。

5.已有基于样品在含有EDTA的碱性溶液中预孵育，消除Mg ^{2 +}的干扰，并使蛋白质变性，然后加入苄索氯铵，产生浊度反应的上机沉淀比浊法试剂盒。所需样本量少，重复性及准确性较高。

在有柠檬酸(又名“枸橼酸”)的酸性环境中，酸性染料伊红Y离解成阴离子型;而蛋白质中的精氨酸、组氨酸、赖氨酸和色氨酸残基则解离生成带 基团，可与阴离子型伊红Y染料的羧基和酚基以静电引力结合，生成540nm有吸收峰的红色蛋白染料复合物，其吸光度大小与蛋白质浓度成正比。

1.0. 1%伊红Y存储液　准确称取100.0mg水溶性伊红Y (勿用醇溶性伊红Y)，以蒸馏水溶解、定容至100ml，密闭冷藏备用。

2.10% Brij-35溶液。

3.显色剂　取0.1%伊红Y存储液3.75ml、10% Brij-35溶液0.4ml，以蒸馏水稀释、混匀，定容至50ml。每次不宜配制过多。

4.10%柠檬酸溶液。

5.700mg/L蛋白标准工作液　取70g/L总蛋白标准液1.0ml，用含防腐剂叠氮钠的生理盐水稀释定容至100ml。

如果用试剂盒，应选用有正式批文，质量可靠的试剂盒。

按表2-1-9操作。

各管混匀，室温下放置10分钟，30分钟内在540nm波长以1.0cm光径比色杯，空白管调零，读取测定管和标准管吸光度。

本法显色在1～5分钟进行性增加，10～30分钟趋于平稳，可稳定2小时。线性范围可达1000mg/L，若CSF总蛋白浓度过高，潘迪蛋白定性试验达+ +及以上者，应减少CSF加入量或稀释，结果需做相应校正。柠檬酸溶液的加入对本法的影响大，必须保证准确，并最好边加边摇匀。

亦有使用酸性染料考马斯亮蓝的同样方法，灵敏度更高。但不管是使用伊红Y还是考马斯亮蓝，CSF总蛋白的染料结合法都存在白蛋白易结合呈色，而球蛋白不易结合呈色的共同问题。因此CSF存在较多球蛋白的病理情况下，不能真实反映其总蛋白浓度。

成人腰池CSF总蛋白: 150～450mg/L。

CSF总蛋白升高常见于颅内感染等各种原因致血脑屏障通透性增加，各种颅内疾病，颅内及全身性出血性疾病，以及脑脊液循环阻塞。CSF总蛋白升高的常见病症见表2-1-10，应结合其他临床资料及CSF其他检查结果，综合分析。