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二、光镜检查
肾活检组织光镜标本的制作包括固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和染色等步骤。
1.固定
供光镜检查的肾穿刺组织尽快浸入固定液,常用固定液为10%中性甲醛和95%乙醇溶液。也可用FAA混合液,包括10%甲醛10ml、冰醋酸5ml和95%乙醇85ml。固定液可置于室温或4℃环境中,不可冷冻。
2.脱水
脱水的目的是去除组织中的水分,便于石蜡充分浸入组织内。逐级使用升高浓度的乙醇依次脱水:70%→80%→90%→95%→无水乙醇。
3.透明
透明的目的是将不能与石蜡结合的脱水剂即乙醇置换出来,使能与石蜡结合的媒介剂浸入,并使组织透明。常用的透明剂是二甲苯。
4.浸蜡
经透明的组织移入石蜡中浸泡浸蜡。浸蜡是使组织有一定支撑物,便于切片。浸蜡3~4小时。
5.包埋
浸蜡充分的肾组织用石蜡包埋,便于在切割机上切片。
6.切片
石蜡切片厚度以2~3μm为宜。
7.染色
染色前需要脱蜡,将石蜡切片中的石蜡溶解。常规进行苏木素-伊红染色(HE)、过碘酸雪夫反应染色(PAS)、六胺银染色(PASM)和马松三色染色(Masson染色)。HE染色是病理检查必用的常规染色方法,主要观察细胞核进而辨认细胞种类、观察肾小管上皮细胞变性和萎缩,是理想的染色方法。PAS染色可观察到糖原物质,并可显示基底膜和系膜基质,而PASM对基底膜的显示更为精细。Masson染色除显示基底膜外,尚可观察一些特殊蛋白的沉积,如免疫复合物等。